Листериоз -острая природно-очаговая зооантропонозная инфекционная болезнь многих видов животных и птиц, характеризующаяся поражением центральной нервной системы, сепсисом, абортами и маститами. Листериозом болеет и человек.
Листериоз является одной из широко распространенных бактериальных инфекций в Казахстане и представляет актуальную проблему. Особую обеспокоенность вызывают участившиеся случаи заболевания листериозом людей. Механизм заражения людей многообразен, чаще всего происходит алиментарным путем через инфицированную воду и пищевые продукты животного происхождения, особенно, при отсутствии надежной термической обработки и длительном хранении в условиях относительно низких температур.
К листериозу восприимчивы по нисходящей — овцы, козы, крупный рогатый скот, свиньи, лошади кролики, куры, гуси, утки, индейки. Болезнь может поражать животных всех возрастов, но особую чувствительность проявляют молодые и беременные животные.
Возбудителя листериоза во внешнею среду выделяют многие виды диких и синантропных грызунов: волки, лисицы, еноты, зайцы, кабаны, белки, ондатры, водяные и серые крысы, суслики, тушканчики, косули, обезьяны; воробьи, скворцы, сороки, куропатки, глухари, тетерева, фазаны, утки, орлы и др. Листерии также обнаружены в рыбе и продуктах моря (креветки). Из лабораторных животных легко заражаются-белые мыши, крысы, морские свинки и кролики.
Источником листериоза являются скрыто и явно больные домашние и дикие животные, которые выделяют бактерии во внешнюю среду с носовым истечением, калом, мочой, молоком, абортированными плодами и истечением из половых органов. При листериозе имеет место многообразие путей передачи возбудителя болезни (фекально-оральный, контактный, аспирационный, транспланцентарный). Основным путем заражения животных считается алиментарный путь, а также через слизистые оболочки глаз, носовой полости и поврежденную кожу. Наиболее часто заражение происходит при скармливании животным инфицированных кормов. Доказана возможность передачи листериоза блохами, вшами, иксодовыми и гамазовыми клещами.
Болезнь у животных регистрируется во все времена года. У овец, коз, крупного рогатого скота ввиду снижения резистентности организма вследствие неполноценного кормления (витаминная и минеральная недостаточность), а также усиленной зимней миграции грызунов на фермы и места хранения кормов болезнь чаще регистрируется в зимне-весенний период [1, 2, 3, 4, 5].
Цель работы. Нашей задачей являлось изучение биологических свойств листерий, выделенных от павших животных их идентификация.
Материалы и методы. Работа выполнялась на кафедре микробиологии и вирусологии, а также в лаборатории противобактериозной биотехнологии НАО Казахского национального аграрного университета и в ряде хозяйств Казахстана.
Материалом для бактериологического и серологического исследований служили различные органы (почки, печень, селезенка, легкие, головной мозг, трубчатая кость) от павших новорожденных ягнят, абортированный плод.
Для получения первичных культур использовали следующие питательные среды: МПА, ПЖА, МПБ, среды Кита – Тароцци, Эндо. Первичный отбор культур проводился на основании особенностей роста на средах и микроскопии препаратов из отдельных колоний.
У выделенных культур изучали морфологические, культуральные, биохимические свойства по общепринятым схемам (Н.И. Розанов, 1952). Патогенность выделенных культур определялась путем постановки биопробы на лабораторных животных. Выборочно проверена чувствительность выделенных культур к антибиотикам.
Идентификацию выделенных культур проводили по определителю Бержи [6].
Ферментацию углеводов определяли на ПЖА (0, 075 %) с индикатором Андредэ, с различными сахарами и многоатомными спиртами: галактозой, глюкозой, арабинозой, ксилозой, лактозой, мальтозой, сахарозой, рафинозой, маннитом, дульцитом, сорбитом, глицерином. Учет ферментативной активности культур проводили в течение 10 суток.
Антигенные свойства культур определялись моно- и полирецепторными агглютинирующими сыворотками.
В работе были использованы современные сертифицированные и стандартизированные биохимические, микробиологические, молекулярно-биологические исследования. Для математической обработки результатов были использованы стандартные методы нахождения средних значений и их средних ошибок.
Результаты исследования. Анализ ветеринарной отчетности Комитета ветеринарии МСХ РК по инфекционным заболеваниям показал, что листериоз овец имеет значительное распространение среди поголовья овцеводства, нанося большой экономический ущерб всем категориям хозяйств.
В ряде хозяйств Казахстана за учётный период зарегистрированы случаи заболевания овец листериозом. В исследованных хозяйствах у овец часто наблюдалось неестественное искривление (боковое) шеи, круговые движения, потерю равновесия, оглумоподобное состояние, расширение зрачков, ослабление или полную потерю зрения, у беременных овец -аборты и рождением мертворожденных ягнят.
Патологоанатомические изменения зависят от формы болезни и длительности ее течения. При нервной форме болезни отмечаем гиперемию сосудов и отечность мозга и мозговых оболочек. На твердой, реже мягкой мозговых оболочках-кровоизлияния. Кровоизлияния при вскрытие головного мозга находим также в мозговой ткани-чаще в мозжечке, обонятельных луковицах и у основании мозга. Черепная полость и желудочки мозга содержат мутноватую жидкость, в которой иногда находим примесь гноя. У отдельных павших животных отмечаем размягчение мозга, вплоть до абсцессов в мозговой ткани. Печень, почки, селезенка увеличены в размере и переполнены кровью, с множественными кровоизлияниями с дегенеративными изменения и некротическими очагами.
Абортированные плоды отечные, подкожная клетчатка в области головы, подгрудка и груди студневидно инфильтрирована. В грудной и брюшной полостях находим скопление красноватой жидкости. В печени, селезенке, миокарде и головном мозге находим мелкоочаговые некрозы.
Материалом для бактериологического исследования являлся патологический материал от 20 абортированных плодов и 20 пробы из различных органов (почки, печень, селезенка, легкие, головной мозг, трубчатая кость) от павших новорожденных ягнят.
В результаты бактериологического исследования у 11 (55%) абортированных плодов из 20 и у 9 (45%) проб от павших новорожденных ягнят из 20 были выделены листерии.
Биологические свойства 20 штаммов Listeria monocytogenes, выделенных из абортированных плодов и из различных органов, изучали на МПА, МПБ, ПЖА.
Исследуемые культуры листерий росли на чашках с МПА агаром в виде мелких, слизистых, круглых, прозрачных колоний, при проходящем или молочно-белых в падающем свете, выпуклы колоний диаметром 0,2- 0,4 мм. Через 3-4 дня колонии увеличивались в диаметре до 3 мм, приобретали серовато – белый цвет и неровные расплывчатые края.
На МПБ отмечались помутнения с образованием слизистого осадка.
Выделенные листерии были подвижны при температуре от 220С до 370С. В мазках из образовавшихся колоний, окрашенных по Грамму, листерии располагались параллельно друг к другу, одиночно или в коротких цепочках, или V-образно, окрашенные в фиолетовый цвет.
Биохимические свойства листерий изучали путем проведения посевов на среды Гисса. Учет результатов проводили следующим образом: после посева бактерий, если они ферментируют углеводы, наблюдают появление красной расцветки, которая свидетельствует об изменении рН в кислую сторону (образование кислоты), порой из поплавка вытесняется жидкость. В этом случае делали вывод об образовании газа. Для определения каталазной активности делали посев на поверхность плотной питательной среды. Затем наносили каплю 10%-го раствора Н2О3 на выросшую колонию. Выделение О2, хорошо заметное по образованию пузырьков, свидетельствует о наличии в клетках каталазы. Протеолитические свойства определяли посевом на желатину.
Культуры листерий обладали сахаролитическими свойствами. Листерии ферментировали глюкозу, мальтозу, салицин, но не ферментируют арабинозу, дульцит, инулин, сорбит. Обладали каталазной активностью, не выделяли уреазу, не образуют индол, продуцируют ацетил – метил – карбинол. Сероводород и индол на обычных средах не образует. Желатин листерии не разжижают. Через 10 -12 суток в желатине образовался рост изучаемых штаммов листерий в виде мелких гранул.
Патогенность исследуемых культур проверяли путем заражения белых мышах в дозах 103, 104, 105, 106, 107 КОЕ. Для каждой дозы культуры использовали по 5 мышей. Гибель животных начала отмечаться с 3 суток. При вскрытии лабораторных животных отмечались идентичные патологоанатомические изменения, которые проявлялись увеличением печени и селезенки с характерными серо – белыми очагами на органах.
При этом установлено, что доза 105-107 КОЕ вызывает 100% — ную гибель лабораторных животных. Это свидетельствует о высокой вирулентности исследуемых культур.
Важным признаком изучаемых культур является определение чувствительности штаммов к антибиотикам. Для определения чувствительности к антибиотикам применили чашечный метод с использованием бумажных дисков, пропитанных растворами различных концентраций испытуемого антибиотика. Исследуемую культуру смыли с агара физиологическим раствором, приготовили взвесь 109 КОЕ и 1 см3 ее засеяли сплошным слоем по всей поверхности агара. Засеянные чашки подсушили в термостате 30 мин при 370С. Бумажные диски с антибиотиками разложили на засеянный агар стерильным пинцетом на расстоянии 2см от края, слегка прижимая к среде. Учет результатов производили по величине зоны задержки роста микробов вокруг бумажных дисков, включая их диаметр.
Выделенные культуры листерий показали высокую чувствительность к бензилпенициллину, эритромицину, гентамицину и мономицину, но оказались малочувствительны к стрептомицину, метициллину, неомицину.
Заключение. Листерий, выделенных из патологического материала от 20 абортированных плодов и 20 проб из различных органов (почки, печень, селезенка, легкие, головной мозг, трубчатая кость) от павших новорожденных ягнят обладали типичными морфологическими, тинкториальными, биохимическими и антигенными свойствами, присущими этому виду и обладают достаточно высокой вирулентностью.
Проведенные клинико-эпизоотологические, бактериологические исследования в исследуемых хозяйствах показали, что основной причиной абортов у овцематок и гибель новорожденных ягнят является листериоз.
Использованные источники:
- Черкасский Б.Л. Мат. Международного Симпозиума «Пищевые зоонозы, сальмонеллезы, кампилобактериоз, иерсиниозы, листериоз. Методы и средства диагностики, лечения и профилактики». М., 1995, с. 18-
- Outbreak of Listeriosis linked to the consumption of pork tongue in jelly in France. WHO Newsletter N64, June 2000, p.3.
- Шевелева С.А., Ефимочкина Н.Р. Анализ микробиологического риска как основа для совершенствования системы оценки безопасности и контроля пищевых продуктов. /Мат. X Всероссийского съезда гигиенистов и санитарных врачей, М., 2007.с.21-24
- Biyashev K. B., Makbuz A. Z., Biyashev B. K.. Prevalence of Causative Agents of Emergent Food Zoonotic Diseases in Animals, Animal Origin Products and Environmental Objects //Biology and Medicine Journal. ISSN: 0974-8369 -2016 — Volume 8 Issue 2 BM-169-16 Scopus.
- Пискунов А.В. Усовершенствование методов выделения и идентификации Listeria monocytogenes . Автореферат канд. дисс. 2013. 56 С.
- Определитель бактерий Бержи. //под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита и др. 9-е издание. М., Мир, 1997, 800 с.
