Одним из опасных для человека заболеваний является сальмонеллез, который проявляется обширной интоксикацией организма и другими обширными поражениями. Сам патоген можно обнаружить в яйцах, молочных и мясных продуктах. Микробы Salmonella spp. могут вызывать серьезные заболевания при поступлении в организм человека с пищевыми продуктами, подвергшимися недостаточной термической обработке. Особенно тяжелое течение заболевания наблюдается у лиц с ослабленным иммунитетом, у маленьких детей и лиц пожилого возраста. В теплое время года отмечается быстрое размножение бактерий, скорая порча продуктов и как следствие более сильные и частые пищевые отравления. Переносчиками болезней часто становятся грызуны, птицы, домашние животные. Соприкасаясь с человеческой пищей, они могут ее заразить. Именно поэтому первоочередной задачей при обеспечении безопасности жизни и здоровья людей является недопущение продукции, содержащий бактерии рода Сальмонелла на потребительский стол. Бактерии выявляются с помощью микробиологических методов, включающих в себя посев, микроскопирование и иногда экспресс-методы.
В статье мы решили сравнить классический и экспресс-метод обнаружения бактерий рода сальмонелла в свином фарше. За экспресс-метод был взят прибор Vidas, который используют современные лаборатории, хотя наряду с них применяют и классические методы. Применение Vidas регламентировано ГОСТ Р 54354-2011 и МР 11-3/278-09. Vidas — это прибор, который позволяет делать наиболее точными анализы проб. В его комплектацию входит сам анализатор и подключенный к нему компьютер, на котором установлена специальная программа, а также принтер (для печати результата).
Рассмотрим принцип работы прибора. Наконечник SPR используется как пипетирующее устройство и носитель твердой фазы. На его внутреннюю поверхность нанесены специфические антитела, к возбудителю, указанному на упаковке с тест-набором. Реактивы, необходимые для проведения исследования находятся в лунках стрипа. Все этапы анализа автоматизированы. Бульон обогащения вносится в стрип. Специфические антитела, находящиеся на внутренней поверхности наконечника, взаимодействуют с антигенами. Таким образом клетки микроорганизмов фиксируются на внутренней поверхности наконечника. Несвязанные компоненты удаляются на этапе отмывки.
В конце анализа прибор автоматически рассчитывает результат, сравнивает полученные значения с хранящимися в памяти пороговыми и интерпретирует результат как отрицательный или положительный.
При выполнении анализа применена технология, исключающая возможность перекрестной контаминации проб.
VIDAS содержит 5 секций в каждой из которых может быть размещено до 6 стрипов с максимальной производительностью до 60 тестов в час.
Пипеткой исследуемая проба помещается в стрип. После этого прибор пишет, через сколько будет готов анализ. Через 48 минут уже был готов результат на наличие или отсутствие в исследуемой пробе Salmonella spp. В нашем случае прибор выдал отрицательный результат на наличие бактерий рода Salmonella в свином фарше.
Энергозатратность классического метода мы решили показать на примере выявления патогенных микроорганизмов рода Salmonella в свином фарше, который был приобретен в торговой сети г. Москвы.
Согласно Техническому регламенту Таможенного союза 021/2011 «О безопасности пищевой продукции» в 25 г мяса и шпика не допускается наличие бактерий рода Salmonella. Бактерии рода Salmonella определяют согласно ГОСТ 31659-2012.
Для начала производим отбор навески свинины 25 г строго под горелкой в ламинарной системе. Потом переношу также над горелкой эту навеску во флакон с 225 мл ЗПВ — забуференная пептонная вода. ЗПВ служит средой первичного обогащения, которую используют для повышения высеваемости поврежденных сальмонелл из пищевых продуктов (перед селективным обогащением и выделением). Среда богата питательными веществами и обеспечивает возможность восстановления и интенсивного роста угнетенных бактерий. Фосфатный буфер защищает бактерии от гибели в результате изменения рН среды. Затем флакон с ЗПВ и навеской ставлю в термостат на температуру (37±1) °С на время 18±2 ч. После производим обогащение в селективной жидкой среде. Для этого по 1 см³ культуры пересеваем в 10 см³ RVS-бульона и в 10 см³ селенитовой среды или в 10 см³ тетратионатного бульона Мюллер-Кауфмана. Пересев производится стерильной пипеткой в той же ламинарной системе под пламенем горелки. После посева RVS-бульон ставим в термостат при температуре (41,5±1,0) °С в течение (24±3) ч, а МКТ-бульон при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.
Культуры пересевают на две селективные агаризованные среды:
— ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар (XLD-aгap);
— висмут-сульфит агар, и среду Эндо.
Посевы на агаризованных средах инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.
В итоге при идентификации ни на Рамбах агаре, ни на ВСА, ни на Эндо бактерий рода Salmonella не выявлено.
Заключение.
Современные экспресс-методы являются отличной альтернативой классических, ведь при их применении экономится много времени, что очень важно, когда идет большой поток образцов для исследований на обсемененность. Также эти методы позволяют снижать затраты, являются более понятными при использовании, а также имеют более продолжительные сроки хранения. Да, некоторые из них дорогие и требуют подтверждения классическими методами.
Список литературы:
- Li, X., Boudjellab, N. and Zhao, X. Combined PCR and slot blot assay for detection of Salmonella and Listeria monocytogenes. J. Food Microbiol. 56, 2000. — p. 167–177;
- ГОСТ 31659-2012 (ISO 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella;
- ГОСТ Р 54354-2011. Мясо и мясные продукты. Общие требования и методы микробиологического анализа;
- МР 11-3/278-09 Методы выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах с использованием анализатора Vidas/miniVidas производства фирмы «BioMerieux», Франция;
- МУ 4.2.2723-10 Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды;
- ТР ТС 021/2011 О безопасности пищевой продукции.
