ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ВАКЦИННОГО ШТАММА S.CHOLERAESUIS 51

Введение. Проблема значительного снижения сальмонеллеза животных разрешается на основе проведения широких ветеринарно-санитарных и зоотехнических мероприятий, где важное место занимает специфическая вакцинопрофилактика.

При сальмонеллезах животных наиболее изучены и апробированы различные варианты убитых вакцин. Некоторые из них применяются и в настоящее время.

Для профилактики сальмонеллеза поросят используют убитую формолвакцину, состоящую из штаммов S. choleraesuis, S. dublin, S. typhimurium, а также ассоциированную (поливалентную) вакцину и против паратифа (S.choleraesuis), пастереллеза и диплококковой септицемии.

В последние годы в ветеринарной практике для профилактики сальмонеллеза свиней применяется вакцина из супрессорного ревертанга сальмонелла холерасуис №9 (Б.Ю. Шустер, 1988; вакцина из штамма ТС- 177. Б.А. Матвиенко, 1986).

Недостатком этих вакцин является то, что в одних случаях необходимо многократно прививать животных в больших дозах, свидетельствующее о недостаточной иммуногенной активности формолвакцины, в других случаях о невозможности установления механизма действия выбранного мутагена на получение аттенуированных штаммов, позволяющие отличать их от естественных прототипов, то есть отсутствуют генетические метки [1, 2, 3, 4, 5].

В связи с этим, получение и внедрение новых аттенуированных штаммов S.choleraesuis является актуальной задачей в области дальнейшего совершенствования специфической профилактики сальмонеллеза сельскохозяйственных животных.

Цель работы. Целью исследования являлось изучение иммуногенных  свойств вакцинного штамма S.choleraesuis 51.

Материалы и методы. Работа выполнялась с применением методик, используемых в международной научной практике и постоянно совершенствовалась за счет патентно-информационных проработок.

Объектом исследования явился вакцинный штамм S.choleraesuis 51.

Вакцинный штамм S.choleraesuis 51 получен генетическим методом и отвечает всем требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам: об­ладает стабиль­ностью биологических свойств, умеренной реактогенностью и остаточной вирулентностью, высокой иммуногенностью, эпизооти­чески безопасен для исполь­зования и имеет генетические маркеры для отличия его от штамма естественного происхождения.

Штамм Salmonella сholeraеsuis 51 депониро­ван в Коллекции микроорганизмов Республиканского государственного предприятия «Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности» Министерства образования и науки Республики Казахстан (РГП НИИПББ КН МОН РК). Коллекционный номер M-41-15/D. На штамм S.choleraesuis 51 получен пположительное решение на выдачу Патента за №2016/0747.1 от 14.12.2016г.

Результаты исследования. Иммуногенная активность вакцинного штамма S.choleraesuis 51 испытывалась на морских свинках и поросятах. При постановке иммунологических опытов не упускалась возможность учета местной и общей реакции, бактерионосительства, накопления антител (поросята), напряженности иммунитета после смертельного заражения.

В опытах на морских свинках испытывалась иммунизирующая активность суточных культур штамма S.choleraesuis 51, выращенных на МПА (взвесь на физиологическом растворе), в сравнении с живой вакциной из штамма ТС-177 и формолвакциной.

Морские свинки, иммунизированные штаммом 51 и ТС-177 однократно, в дозах 108, 3х108, 5x108, 109КОЕ при последующем заражении смертельными дозами вирулентной культуры 370 (2 х 109 КОЕ) остаются живыми соответственно 51 (85-100%) и ТС-177 (65-100%) случаев, тогда как среди вакцинированных формолвакциной двукратно в дозе 4x109 КОЕ. выживаемость подопытных свинок составляет 40%. Все контрольные свинки (не вакцинированные) погибли.

Таким образом опыты, проведенные на лабораторных животных (морские свинки) по проверке иммуногенной активности штамма S.choleraesuis 51 в сравнении с вакцинным штаммом S.choleraesuis ТС-177 и формолвакциной, позволили сделать заключение, что штамм S.choleraesuis 51 создает иммунитет высокого напряжения и процент выживаемости у него выше, чем у вакцинного штамма S.choleraesuis ТС-177 и формолвакциной.

Полученные экспериментальные данные позволили нам продолжить опыты на поросятах.

В задачу исследований на поросятах входило изучение местной и общей реакции на введение культуры штамма S choleraesuis 51, выявление бактерионосительства, определение агглютинационного титра в процессе иммунизации, изучение иммуногенных свойств.

Иммуногенвость штамма 51 изучались в сравнении с вакциной из штамма ТС-177 и формолвакциной. В опыте было использовано 70 подсосных поросят 10-дневного возраста, из них 20 поросят (1 группа) были вакцинированы однократно вакциной из штамма S.choleraesuis 51 внутримышечно, в дозе 109 КОЕ, 20 поросят (2 группа) вакциной из штамма S.choleraesuis ТС-177 двукратно согласно наставлению по применению вакцины из штамма ТС -177 (первый раз в 10-дневном возрасте (3x108 КОЕ.) и повторно через две недели (7x108 КОЕ).  20 поросят (3 группа) иммунизировались убитой формолвакциной двукратно, в дозе по 2 мл (8xl09 КОЕ.). 10 поросят были в контрольной группе (непривитые).

За подопытными поросятами велось наблюдение, ежедневно измерялась температура тела и проводились серологические исследования.

У вакцинированных поросят штаммом 51, в первые сутки отмечалось состояние некоторой подавленности, небольшое повышение температуры на 0,5° С, аппетит сохранялся. На месте введения появлялись ограниченные отеки, которые рассасывались на 2-3 сутки.

Для заражения поросят использовалась агаровая культура штамма S.choleraesuis 370, которая выращивалась в течение 18 часов в термостате, при температуре 37°С, затем проводился смыв бактерийной массы стерильным физиологическим раствором, и концентрация взвеси доводилась до 109 КОЕ в 1 мл по оптическому стандарту.

Поросята, вакцинированные штаммом S.choleraesuis 51 (1-группа) заражались через 15 суток после вакцинации, а поросята, вакцинированные штаммом S.choleraesuis ТС-177 (2 группа) и формолвакциной (3 группа) спустя 15 суток после второй вакцинации. Заражение опытных и контрольных животных производили внутрибрюшинно.

Напряженность иммунитета проверялась по степени выживаемости, температурной реакции, гастроэнтеритическими расстройствами.

Через 5-6 часов после заражения у поросят всех групп отмечалось значительное угнетение, поросята отказались от корма. Утром, вечером измеряли температуру тела ежедневно. На второй день наблюдалось повышение температуры до 40°С. Высокая температура у поросят первой группы удерживалась в течение 2-3 суток, а у поросят 2-й группы - в течение 3-5 суток. Затем температура к общее состояние нормализовались. В течение срока наблюдения (15 суток) из 1- группы выжили все подопытные животные, из 2-группы -95% животных. У поросят 3 группы высокая температура наблюдалась в течении 9-10 суток. Общее состояние сопровождалось угнетением, уменьшением аппетита, перемежающимся поносом. Выжило 45% животных.

У контрольных поросят наступило резкое угнетение, отказ от корма, постоянная температурная реакция с повышением до 42°С и выше, профузный понос с примесью слизи и крови, парез задних конечностей, посинение вначале кожи ушей, а затем и живота. Контрольные животные пали на 7-10 сутки после заражения.

У всех павших контрольных поросят на вскрытии обнаружены изменения типичные для острого сальмонеллеза. Отмечены не резко выраженные типичные кровоизлияния на эпикарде, серозных и слизистых оболочках, под капсулой почек и в лимфатических узлах. Лимфатические узлы (паховые, средостенные, брыжеечные) увеличены, набухшие, поверхность разреза сочная. Печень наполнена кровбю, неравномерно окрашена. Селезенка несколько увеличена, края закруглены, темно-вишневого цвета.

В желудке, тонком и толстом отделах кишечника отмечены изменения характерные для острого катарального воспаления. Слизистые оболочки набухшие, сильно гиперемированы с мелко точечными кровоизлияниями.

Для бактериологического исследования проводились посевы из крови, легких, печени, селезенки, почек, костного мозга, а также из лимфатических узлов: паховых, брыжеечных, подчелюстных, средостенных. При этом отмечался обильный рост заражающей культуры Salmonella choleraesuis.

Заключение. Проведенные опыты на животных свидетельствуют, что вакцина из штамма S. choleraesuis 51 вызывает у животных доброкачественную общую и местную реакцию, не вызывает генерализации процесса и вакцинального бактерионосительства, создает иммунитет высокого напряжения и процент выживаемости у него выше, чем у вакцины из штамма S.choleraesuis ТС-177 и формолвакцины.

Использованные источники:

  1. Матвиенко Б. А. Актуальные вопросы иммунопрофилактики сальмонеллезов животных // Сб. научных трудов, АЗВИ, Алма-Ата, 1986, С. 54 – 55.овлечение на микробную клетку, ограниченной циркуляции антигена и отсюда недостаточное вовлечение клеток иммунной системы
  2. Шустер Б. Ю., Малахов Ю. А., Киржаев Ф. С., Персов А. С. Итоги внедрения в практику вакцины живой сухой против сальмонеллеза водоплавающей птицы // Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных, Мат. Всесоюзной конференции, Львов, 1988, С. 336 - 337.
  3. Доклад Комитета экспертов ВОЗ, Борьба с сальмонеллезом: роль ветеринарии и пищевой гигиены, Женева, 1991, С. 18 – 19.
  4. Бияшев К. Б. Профилактика сальмонеллёза В Казахстане, Алма-Ата, 1992, 42 с.
  5. Жеглов В. В., Трояновская Л. П. Состояние технологии производства противосальмонеллезных вакцин на современном этапе и специфическая профилактика сальмонеллеза. // Актуальные проблемы вет. хирургии, Воронеж, 1999, С. 38 -40.